Dettaglio di notizie
Casa » notizia » Ottimizzazione delle comode macchine PCR in tempo reale

Ottimizzazione delle comode macchine PCR in tempo reale

numero Sfoglia:0     Autore:Editor del sito     Pubblica Time: 2021-11-24      Origine:motorizzato

Ottimizzazione delle comode macchine PCR in tempo reale

Se è la PCR quantitativa fluorescenza in tempo reale per la quantificazione dei virus e la genotipizzazione SNP, abbiamo bisogno di una macchina PCR con la massima specificità possibile; Se è patogeno e rilevamento dell'mRNA, abbiamo bisogno di alta sensibilitàMacchina PCR., quindi come dovremmo ottimizzare questa macchina PCR?

Ecco l'elenco dei contenuti:

Per migliorare l'efficienza dell'amplificazione della macchina PCR

L utilizzando i primer della macchina PCR in tempo reale per PCR General PCR

Migliorare l'efficienza dell'amplificazione della macchina PCR

Migliorarela macchina PCR.Efficienza, specificità e sensibilità dell'amplificazione, possiamo ottimizzare la macchina PCR quantitativa di fluorescenza in tempo reale per l'esperimento attraverso una serie di misure. Il primo è la selezione della sequenza di destinazione.

1, la scelta della comoda sequenza di destinazione della macchina PCR in tempo reale lunghezza appropriata da 50 a 150 mb. Le sequenze più brevi richiedono meno tempo per sintetizzare e avere tempi di amplificazione più brevi, quindi la possibilità di contaminare il DNA che viene amplificato è ridotto.

2, Quando si seleziona la sequenza di destinazione, utilizzare BLAST Cerca per analizzare la sequenza di destinazione per i polimorfismi e gli errori di sequenziamento ed evitarli. Se ci sono sequenze duplicate nella sequenza di destinazione, ridurrà la sensibilità di rilevamento di questa macchina PCR e dovrebbe anche essere evitata.

3, controllare il contenuto GC ≤ 60% nella sequenza di destinazione. L'alto contenuto GC, influenzerà la denaturazione della sequenza di destinazione nel ciclo termico, ma anche facile da produrre questa amplificazione non specifica della macchina PCR.

4, evitare di generare struttura secondaria. Le sequenze di destinazione con sequenze ripetitive inverso sono facili da produrre struttura secondaria, che influenza l'ibridazione di comodi primer e sonde a macchina PCR in tempo reale.

Oltre a ciò, dobbiamo anche garantire che la qualità del modello non influirà sull'amplificazione, i risultati della comoda macchina PCR in tempo reale hanno affidabilità. Ad esempio, il DNA danneggiato non può essere amplificato adeguatamente nella macchina PCR, o non amplificata affatto. Inoltre, la presenza di DNA Polymerasi inibendo i reagenti (DMSO, ecc.) E contaminanti (SDS, ecc.) Nel modello può influire sull'affidabilità dei risultati dell'amplificazione della macchina PCR.

Utilizzo dei primer della macchina PCR in tempo reale per PCR General PCR

Ottenere conveniente in tempo realeMacchina PCR.Primer, questo metodo può anche essere utilizzato per la normale PCR.

1, la lunghezza dovrebbe essere 18-30BP per garantire la specificità del legame.

2, la temperatura di fusione (valore TM) dovrebbe essere 55-60 ° C e i valori TM dei due primer debbano differire di 2-3 ° C.

3, ogni primer dovrebbe avere da 1 a 3 guanine o citosine all'estremità 3 ', che può ridurre comodamente l'amplificazione non specifica durante la macchina PCR in tempo reale. Più di 3 ritorceranno e causerà un \"effetto scorrevole \" che porta all'estensione errata.

4. Il contenuto GC dei Primer dovrebbe essere circa il 50%, il contenuto di GC troppo alto aumenterà il valore TM.

5, i primer della macchina PCR dovrebbero evitare sequenze ripetitive inverso, poiché formerà una struttura secondaria, influenzando il legame del primer sul modello.

6, Se è RT-PCR, è inoltre necessario evitare di progettare i primer per legare le sequenze di esone, che porterà a risultati sperimentali della macchina PCR falso-positivi. L'approccio corretto dovrebbe essere progettato sul lungo fianco di introni, o agli introni brevi, o attraverso la regione di giunzione di Exon-Exon.

7. Denaliando e purificando i primer.

Si noti che a volte, quando hai fatto tutti i punti, i primer non possono amplificare, quindi dovresti ridisegnare i primer.

Concentrandosi su rilevamento rapido di acido nucleico e rilevamento rapido POCT, Bioteke offre tipi di strumenti di laboratorio come: collezione di campionamento antivirus, estrattore di acido nucleico automatico, macchina PCR e apparecchi disinfettanti. E offre anche molti tipi di reagenti e kit.

Immagine dei segnaposto

TELEFONO: 008651068501244.

Diritto d'autoreBioteke Corporation (Wuxi) Co., Ltd