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Come scegliere la soluzione per la conservazione dei campioni?

Pubblica Time: 2021-02-18     Origine: Bioteke

Come scegliere il tipo di soluzione di conservazione?

In base alla composizione del liquido si può grosso modo suddividerlo in due tipologie, inattivato e non inattivato. Tra questi, la soluzione di conservazione del virus inattivato contiene Tris, sale di guanidina, EDTA, ecc., il cui scopo principale è quello di distruggere i rivestimenti proteici di cellule e virus e rilasciare acidi nucleici, in modo che il rilevamento dell'acido nucleico possa essere eseguito mediante successiva RT-PCR fluorescente in tempo reale per determinare se il campione contiene la sequenza del virus.


La soluzione di conservazione inattivata può effettivamente lisare la struttura del virus e fargli perdere la capacità di infettare. È più sicuro per gli ispettori e può inibire efficacemente la riproduzione di funghi e batteri. Tuttavia, a causa dell'aggiunta del sale guanidina, è possibile che rimangano ioni salini nella soluzione dell'acido nucleico. Se la concentrazione è troppo elevata e se l'attività della polimerasi nel kit del test a valle è altamente sensibile alla concentrazione degli ioni salini, ciò causerà un ritardo nel valore Ct del test o addirittura un falso negativo.


La soluzione di conservazione non inattivata comprende generalmente i tipi UTM e VTM. I componenti della soluzione di conservazione dei virus non inattivati ​​si basano principalmente sulla soluzione di Hank. Sulla base della soluzione di Hank vengono aggiunti anche vari tamponi come gentamicina, antibiotici fungini, BSA (il quinto componente dell'albumina sierica bovina), tampone biologico HEPES, aminoacidi, crioprotettori, glicerina e altri componenti utilizzati per mantenere l'integrità e l'attività biologica del virus. La soluzione di conservazione non inattivata preserva meglio l'integrità del virus, quindi il tasso di rilevamento è più elevato, ma necessita di un trattamento di inattivazione con bagnomaria prima del rilevamento.

Gli utenti possono scegliere il tipo di soluzione di conservazione in modo ragionevole in base ai propri scenari di utilizzo.



2、Dopo la conservazione del campione, qual è la sensibilità di rilevamento?

Per facilitare la selezione di diversi tipi di tubi di conservazione, abbiamo testato diversi marchi, in condizioni di conservazione a 4°C e diversi giorni di conservazione. La sensibilità del rilevamento dell’acido nucleico del nuovo coronavirus è la seguente.


Dopo 14 giorni di conservazione a 4°C, il confronto dell'effetto di conservazione di diverse marche di UTM


Per facilitare la selezione di diversi tipi di provette di conservazione, abbiamo testato la sensibilità del rilevamento dell’acido nucleico del nuovo coronavirus con diverse marche, condizioni di conservazione a temperatura ambiente e diversi giorni di conservazione (il primo giorno, il terzo giorno e il settimo giorno). I risultati sono i seguenti.


Dopo 7 giorni di conservazione a temperatura ambiente, confronto degli effetti di conservazione di diverse marche di ITM

Dopo 7 giorni di conservazione a temperatura ambiente, confronto degli effetti di conservazione di diverse marche di VTM




Dopo 7 giorni di conservazione a temperatura ambiente, confronto degli effetti di conservazione di diverse marche di UTM


In generale, il valore Ct di Bioteke è inferiore a quello di alcuni marchi comuni sul mercato, indipendentemente dalla temperatura ambiente o dalle condizioni di conservazione a 4°C. La sensibilità di rilevamento è più elevata e i risultati del test sono più stabili.


3、 Qual è l'effetto della soluzione di conservazione dell'inattivazione (ITM)?

Numero di placche ai diversi tempi di inattivazione (0, 1, 2, 5, 10, 20, 40 min)

Virus

Titolo del virus

Momento di inattivazione

Numero di targa

Accettabilità

y

HSV-1







1×10^5

PFU/mL







0

48

55

51

/

1 minuto

0

0

0

Accettato

2 minuti

0

0

0

Accettato

5 minuti

0

0

0

Accettato

10 minuti

0

0

0

Accettato

20 minuti

0

0

0

Accettato

40 minuti

0

0

0

Accettato



Figure della placca a diversi tempi di inattivazione (0, 1 5 ,40 min) (la placca è mostrata nel riquadro rosso)


Conclusioni:

Il prodotto Bioteke, inattivando i mezzi di trasporto (ITM), può inattivare efficacemente il virus HSV 1.


4、Caratteristiche della soluzione di preservazione dei virus Bioteke


a) Fornire molteplici tipi di soluzioni di conservazione come UTM, VTM e ITM;

b) Può essere utilizzato con il tampone Bioteke per soddisfare molteplici esigenze;

c) Materie prime selezionate, abbinate al kit di estrazione dell'acido nucleico Bioteke per garantire la quantità di copie iniziali del campione.


5. L'ispezione riporta che Bioteke ha ottenuto per Virus Preservation Solution


Standard

Unità di prova

ISO EN11137-1:2015 EN11137-2:2013

ISO EN11137-3:2017

Wujiang Dasheng Testing Technology Co., Ltd.

ISO11737-1:2018

SGS

PORTATA

SGS

ISO10993

SGS

Allegato: ambiente produttivo


Riferimenti

【1】《Nuova guida tecnologica per i test di laboratorio sulla polmonite coronarica (terza edizione)》, Centro cinese per il controllo e la prevenzione delle malattie.

【2】《Linee guida provvisorie per la raccolta, la manipolazione e l'analisi di campioni clinici di pazienti sotto indagine (PUI) per il nuovo coronavirus 2019 (2019-nCoV)》.

【 3 】 A Stephen K Hashmi, Miriam Bührle, Michael Wöl fle,et al.

Qualificazione dei tamponi floccati ad alto recupero rispetto ai tradizionali tamponi in rayon per il monitoraggio microbiologico ambientale delle superfici[J]. pda journal of Pharmaceutical Science & Technology, 2008, 62(3):191.

【4】 Daley P, Castriciano S, Chernesky M, Smieja M. Confronto tra tamponi floccati e rayon per la raccolta di cellule epiteliali respiratorie da volontari non infetti e pazienti sintomatici. J Clin Microbiol, 2006;44(6):2265-2267. doi:10.1128/JCM.02055-05.

【5】Ba Huajie, Jin Ming, Wang Linsheng, et al. Confronto degli effetti della tipizzazione del DNA tra tamponi floccati in nylon e tamponi di cotone[J]. Giornale cinese di medicina legale, 2015(03):53-56.

【6】Liu Yanbin, Liu Tao, Cui Yue, Wang Bo, Luo Fengming. Confronto tra due metodi di campionamento di tampone nasale e tampone faringeo nello screening dell'acido nucleico per la polmonite da nuovo coronavirus[J]. Giornale cinese di terapia respiratoria e critica, 2020, 02:141-143.


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