Introduzione alle macchine PCR

Macchina PCR, noto anche come strumento di amplificazione del gene PCR, strumento di amplificazione della PCR, strumento di amplificazione dell'acido nucleico a catena della polimerasi, è uno strumento che amplifica il DNA specifico utilizzando la tecnologia PCR (reazione a catena della polimerasi). La macchina PCR è ampiamente utilizzata nei laboratori medici e biologici, come ad esempio per determinare se un corpo di test mostrerà le macchine PCR sono ampiamente utilizzate nei laboratori medici e biologici, per esempio, per determinare se un organismo di prova presenta un profilo della malattia genetica, per diagnosticare infettivi malattie, per replicare i geni e identificare la genitorialità. Cos'è una macchina PCR?

Ecco l'elenco dei contenuti:

l La struttura di base di una macchina PCR

l Principio di lavoro della macchina PCR

L Cinetica di reazione delle macchine PCR

La struttura di base di una macchina PCR

Una macchina PCR di solito consiste in una parte di copertura calda, una parte del ciclo termico, una parte di trasmissione, una parte di controllo e una parte di alimentazione, ecc.

Principio di lavoro della macchina PCR

Il principio di lavoro del Macchina PCR è simile al processo di replicazione naturale del DNA, la cui specificità dipende dai primer oligonucleotidici complementari a entrambe le estremità della sequenza target e consiste in tre fasi di reazione di base: estensione di anneatura della denaturazione.

1. Denaturazione del DNA del modello

Il DNA del modello viene riscaldato a circa 93 ° C per un certo tempo per dissociare il DNA del modello a doppio filamento o il DNA a doppio filamento formato da una macchina PCR per renderlo a singolo filamento in modo che possa legarsi ai primer in preparazione Il prossimo giro di reazione.

2. Ricottura (denaturazione) del DNA e dei primer del modello

Dopo che il DNA del modello viene denaturato in singolo filamento dal riscaldamento, la temperatura viene ridotta a circa 55 ° C e i primer sono accoppiati e legati alla sequenza complementare a singolo filamento del DNA del modello.

3. Estensione dei primer

Il coniugato del modello di DNA-primer viene sintetizzato sotto l'azione di TaqDNA polimerasi, usando DNTP come materiale di reazione e la sequenza target come modello, per sintetizzare un nuovo filamento replicato semi-conservato complementare -Ingatura e replicazione semi-conservata.

Ripetendo il processo di estensione anneaturazione, è possibile ottenere più catene replicate semi-conservate "e queste nuove catene possono essere utilizzate come modelli per il ciclo successivo.

La macchina PCR richiede 2 ~ 4 minuti per completare ogni ciclo, e così via ripetutamente, il DNA prodotto in ciascun ciclo può diventare il modello per il ciclo successivo e ogni ciclo amplifica il numero di copia della regione specifica del DNA tra due primer sintetici per 1 -fold e la macchina PCR il prodotto si amplifica rapidamente nella forma esponenziale di 2. Dopo 25 ~ 30 cicli (2 ~ 3 ore), la macchina PCR può teoricamente amplificare il gene più di 109 volte dopo 25 ~ 30 round (2 ~ 3 ore) e, in pratica, può generalmente raggiungere 106 ~ 107 volte.

Cinetica di reazione della macchina PCR

Le tre fasi di reazione del Macchina PCR vengono ripetuti, con conseguente aumento esponenziale della quantità di amplificazione del DNA. L'amplificazione del DNA finale della reazione può essere calcolata usando y = (1+x) n. Y rappresenta il numero di copie del frammento di DNA amplificato, x rappresenta l'efficienza di amplificazione media per amplificazione e n rappresenta il numero di cicli. Il valore teorico dell'efficienza di amplificazione media è al 100%, ma nella fase iniziale della reazione effettiva, l'aumento del frammento di DNA della sequenza target è esponenziale e con l'accumulo graduale dei prodotti della macchina PCR, il frammento di DNA amplificato non aumenta più Esponenzialmente, ma entra nel periodo di crescita lineare o nel periodo stazionario, ovvero l'effetto di stagnazione ", in modo che l'efficienza media della macchina PCR raggiunga l'efficienza media della macchina PCR non raggiunge il valore teorico.

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